命运之夜
圣杯：传说中可实现持有者一切愿望的宝物。而为了得到圣杯的仪式就被称为圣杯战争。
参加圣杯战争的7名由圣杯选出的魔术师被称为御主（マスタ?，英文Master），与7名被称为从者（日文:サ?ヴァント；英文Servant）的使魔订定契约。他们是由圣杯选择的七位英灵，被分为七个职阶，以使魔的身份被召唤出来。
能获得圣杯的只有一组，这7组人马为了成为最后的那一组而互相残杀。
基本没有学习魔术的才能的魔术师主角卫宫士郎，偶然地与从者中的剑士·Saber（セイバ?）订定契约，被卷入圣杯战争当中。fate线中，卫宫士郎发现自己爱上自己召唤出来的从者Saber，但最后得知圣杯的真相，叫Saber亲手破坏了圣杯,导致契约无效化，Saber回到理想乡，从此分隔于两个世界。
还是彼此深爱着。
主人公·女主人公
卫宫士郎（えみやしろう，ShirouEmiya，声优：杉山纪彰；野田顺子（幼年）／台湾：刘杰；雷碧文（幼年））
身高：167cm，体重：58kg
印象颜色：赤铜
擅长：修理、家庭料理
喜欢的东西：家庭料理难对付的东西：言峰绮礼
男主角。为穗群原学园（ほむらばら/Homurabara）高中部二年级学生，口头禅“为什么（なんでさ）”。
见习中的魔术师，10年前冬木市（Fuyuki）大火中的少数生还者之一。被身为魔术师的卫宫切嗣所救出并收养，受卫宫切嗣的影响，是个英雄迷，并发誓长大之后一定要成为“正义的伙伴”拯救所有受到苦难的人们。所以只要是他人的请求他从不会拒绝。很喜欢Saber，对她有特别的爱意（在前面自己一直没发现）。擅长分晰物件结构和修理电器。虽然是魔术师，不过除了强化及投影以外，并不会其他的基本魔术。
天生就对剑特别喜好。此外弓术也早已到达了大师的境界，“箭矢呢，是在射出前就已经射中了的”，因此他唯一的失误只是因为他本来就没有要让箭矢击中红心。拥有技能：投影所有理解范围内的宝具（限定剑属性）。由于本身的属性是剑，虽然并非天才，亦没有卓越的才能，但是凭借着认真和不懈的努力，终于得到了与其付出的努力相对应的成绩，可以在暴走状态下瞬间读取眼里所见的每把剑宝具，并将其投影出来。因此在UBW线中与英雄王匹敌。此外固有结界－无限剑制由于与Archer的心灵状态不大相同，因此唱诵的咒文也有一些差别。
根据投影的规则，就算完美的投影出宝具，也会比原先的宝具降低一个等级。但是可以连同使用者的经验一同拷贝，所以只要投影出来的剑都能够立刻的上手使用，彷佛是自己曾用过的剑一样。
士郎的自我治疗能力是来是他体内Saber的鞘，此宝具必须与Saber建立契约以及她的魔力才能发动，靠近Saber效果更明显。
此外英雄王的EA是采用太古时代的技术所创造出来的，因此连士郎都无法理解其构造。
Saber（セイバー，声优：川澄绫子／台湾：雷碧文/Animax粤语：郭碧珍）
身高：154cm，体重：42kg，三围：B73/W53/H76(cm)
印象颜色：青
喜欢的东西：细慢的吃饭讨厌的东西：大大咧咧的吃饭、装饰过多
属性：秩序·善
本作FATE线的女主角。原型是英格兰传说中的国王，圆桌骑士团的首领——亚瑟王（KingArthur）。与士郎订定契约o剑士的英灵，是个拥有一头亮丽金发与深绿眼睛的美少女。她的职阶（class）被誉为所有从者中最优秀的。性格忠诚老实，一本正经，不爱言谈，也很有责任感，不过有时也会显现出少女该有的样子。到后半段对主人卫宫士郎，也产生了爱情（为傲娇的代表人物之一）。因为主人不懂得最基本的魔力回流魔术，因而无法补给魔力给她，必须自行由食物和睡眠里补给，平时用风王结界（BarrieroftheWindKing）令剑处于隐形状态。特别喜欢女孩子不喜欢的狮子。
真实身份是不列颠传说的英雄亚瑟王，真名为阿尔托莉雅（ArturiaPendragon）的女性，拥有亚瑟王的神剑Excalibur（誓约胜利之剑）。来到现世，目的只有一个，取得圣杯并实现回去古时不列颠，把王位传于下一代。装置于士郎体内的宝具是Saber曾经遗失的剑鞘“绝世独立的理想乡（Avalon）”，因此就算受了极近濒死状态的伤势都能够顺利的复原。是当年切嗣为了救士郎而将概念武装Avalon放在士郎体内的。在与英雄王的战斗下，使用了Avalon成功的遮断了英雄王的EA，由于那是传说中亚瑟王死后到达的"理想乡"，因此就连五大魔法都无法对其干涉。
远坂凛（とおさかりん，RinTohsaka，声优：植田佳奈／台湾：杨凯凯/Animax粤语：吴梅）
身高：159cm体重：47kg三围：B77/W57/H80(cm)
生日：2月4日血型：O型
印象颜色：红
擅长：毫无错漏的处理事情
喜欢的东西：宝石磨光难对付的东西：电子机器全能、突发性的事件
本作UBW（UnlimitedBladeWork）线的女主角。与士郎在同一个学园（2年A组）读书的美女魔术师。为有着悠久历史的魔术名门远坂家的继承人，传说远坂家祖上的大师父是魔法使，而远坂家世代为冬木市这块土地的管理者，继承先父的遗志参加圣杯战争。在学校扮演着优等生的身份，但事实她是一名爱嘲讽和作弄别人的小恶魔型少女但同时也是一个爱照顾人的大姐姐。作为魔术师有着高强的实力，不过经常在重要的地方发生失误。
凛擅长的是宝石魔术，一般魔力在自己体外后容易气化难以保存，但是远坂的血统与宝石相性相当的高，每日都可以把自己多余的魔力保存，日积月累下来下的威力(跟价值)都相当可观，其中凛有十颗威力高达A+可伤害从者的宝石，但是在Saber的A级对魔力下会无效化。
由于宝石魔术是属于用完即丢的模式，花费相当的大，因此对金钱话题十分的敏感。凛其实是个贫穷的大小姐。
在料理方面，至少在中华料理上比士郎要擅长。
间桐樱（まとうさくら，SakuraMatou，声优：下屋则子／台湾：林美秀/Animax粤语：潘芳芳）
身高：156cm体重：46kg三围：B85/W56/H87（cm）
生日：3月2日血型：O型
印象颜色：樱花色
擅长：家务全能、按摩
喜欢的东西：甜的东西、怪谈难对付的东西：体育、体重计
本作HF（HeavensFeel）线的女主角。间桐慎二的妹妹，比士郎低一个年级的后辈，同时是弓道社社员，对士郎而言像是妹妹一样的存在。在士郎面前总是充满笑容，拥有沉稳的性格，过去经历十分阴暗，后来由于藤村大河和卫宫士郎的影响变得比较开朗，现在每日都到士郎的家准备早饭、晚饭。
本名是远坂樱，与凛是姐妹，因魔术师家族只会把魔术刻印传给其中一个继承者所继承，而间桐家同时要求过继一个拥有魔术回路的人当继承人，所以远坂樱成为了间桐樱，被间桐家折磨了11年，拥有与凛相当的魔术回路。
Servant（サーヴァント）
Archer（アーチャー声优：诹访部顺一／台湾：黄天佑）
身高：187cm，体重：78kg
印象颜色：红
擅长：修理、家务全能
喜欢的东西：所以家务（本人否认）难对付的东西：正义的伙伴
属性：中立·中庸
与凛订定契约o弓兵的英灵。经常嘲讽他人的现实主义者，不过与凛之间互相有着坚强的羁绊。喜欢单独行动，明明是Archer却喜欢近身战，拿手的武器是雌雄双刀－干将莫邪，超人的弓技直到Fate/hollowataraxia才展现。他本人自称由于召唤时的事故忘了自己的真身为何，拿手的技术是家事全能，凛曾称赞过他泡的红茶非常好喝。
有【錬鉄の英雄】的别名。本次圣杯战争唯一来自未来的英灵，真名是“エミヤ”(Emiya卫宫)，是未来成熟的卫宫士郎，他战斗的一个重要目的是要杀死卫宫士郎以避免重演他自己悲惨的命运。
具有魔术师的能力也是他象征性的宝具“固有结界（BoundedField）”UnlimitedBladeWorks（无限剑制），游戏中曾经击杀狂战士（Berrker）6次，动画中击杀Berrker5次。
Berrker（バーサーカー声优：西前忠久／台湾：黄天佑/Animax粤语：卢雄）
身高：253cm，体重：311kg
印象颜色：铅色
擅长：因为狂化而没有
喜欢的东西、难对付的东西：因为狂化而没有
属性：混沌·狂
狂战士的英灵。其正体是海格力斯（Heracles，或译为赫拉克勒斯、赫丘力士），是希腊神话中最伟大的英雄，身高高达253cm，拥有能使持有者重生并且记录伤害持有者的宝具使其再一次攻击持有者[无效化]的宝具“十二的试练（GodHand）”。虽然职阶是所有从者中最低的，但是拥有所有从者中最优秀的战斗能力,可惜因为狂化的效果,令他不能使出对军宝具射杀百头。海格力斯是这次爱兹贝伦家犯规召唤来的从者，以牺牲理性的方式换取压倒性的破坏力。
如果说Saber是最优秀的Servant，那Berrker则是最强的Servant。
Lancer（ランサー声优：神奈延年／台湾：林谷珍）
身高：185cm，体重：70kg
印象颜色：青
擅长：钓鱼、潜入、登山
喜欢的东西：气势强的女人、无理的约定（约束）
难对付的东西：不直接的方针，背叛
属性：秩序·中庸
枪骑兵的英灵。个性自我、豪放不羁，重视约定胜于性命。持有对人宝具“刺穿死棘之枪（GaeBolg）”，号称必中心脏的魔枪，另一招为“穿刺死翔之枪”，乃威力极大的对军宝具。真身为爱尔兰神话英雄库丘林（CuChulainn，又译库夫林）。一开始为了杀人灭口而追逐撞见自己与Archer之间战斗的士郎，反而促使士郎在情急之下召唤出Saber，喜欢单独行动与痛快淋漓的战斗，侦查任务是在Master命令下不得不为的工作。本性善良，在FATE线曾帮助SABER对抗英雄王吉尔伽美什，在UBW线则保护了凛。同时在UBW线可以看出，Lancer十分的欣赏凛。
Rider（ライダー声优：浅川悠／台湾：钱欣郁/Animax粤语：潘芳芳）
身高：172cm，体重：57kg，三围：B88/W56/H84（cm）
印象颜色：黑
擅长：骑马、惊险的杂技、尾随
喜欢的东西：酒、读书、蛇难对付的东西：镜子、身高测定
属性：混沌·善
骑士的英灵。因此擅长在特殊地形（如高空）战斗。Rider这个职阶同时必需拥有强力宝具才能担任，使用可隐形的锁链刃作为武器。FATE线被Saber所杀，HeavenFeel线TrueEnding与远坂姐妹和卫宫士郎一起生活。
身分为希腊神话中的女妖美杜莎（Medusa，又译梅杜莎）。如同此名有着驾驭传说中天马的骑乘能力，具有极高的机动性，持有宝具为“自我封印o暗黑神殿（BreakerGorgon）”、“他者封印o鲜血神殿（BloodFortAndromeda）”与“骑英之缰绳（Bellerophon）”，也拥有特殊技能石化魔眼（Cybele）。原为间桐樱的从者，但在间桐脏现（ZokenMatou，间桐慎二之祖父）的命令下将令咒转让予间桐慎二。
Caster（キャスター声优：田中敦子／台湾：林美秀）
身高：163cm体重：51kg三围：B82/W57/H84（cm）印象颜色：紫
擅长：奸计、模型制作
喜欢的东西：沉默诚实的人、可爱的衣服和少女
难对付的东西：肌肉
属性：中立·恶
魔术师的英灵，能够使用自神话时代以后就不存在的高等魔术。并以柳洞寺当作根据地，擅长策略。
真实身份为米蒂亚（メディア/Medea），在希腊神话中是以背叛和欺骗闻名的女神，宝具是“破尽万法之符（RuleBreaker）”，用来破除任何契约能力。因自身也是魔术师的关系所以能召唤从者，因此她利用了这个规则漏洞召唤了Assassin。
用计杀死前主人后，被葛木宗一郎捡到，与葛木订下契约（非正式御主）。
Assassin（アサシン声优：三木真一郎／台湾：吴文民）
身高：176cm体重：63kg
印象颜色：群青
擅长：剑
喜欢的东西：花、鸟、风、月难对付的东西：没有特别难对付的
属性：秩序·恶
暗杀者的英灵，有“气配遮断（PrenceConcealment）”这样能偷偷靠近暗杀对象的特殊技能。
本身是一位无名的剑客。但是因为与历史的佐佐木小次郎有着相符的条件，并且学会了佐佐木小次郎的绝技。燕返。而被作为佐佐木小次郎而召唤。
佐佐木小次郎对圣杯没兴趣，只是想与强者过招。没有任何宝具，但凭着一己之力练出了“燕返”（SwallowReversal,同一时间和对手斩出三刀），有着接近对人宝具级的威力。单论剑技的话是众从者中最强的，连Saber也未必是其对手。
由Caster利用自身也是魔术师的规则漏洞召唤订定契约，只拥有生存二十天的灵力，而且不能离开柳洞寺的大门，只能充当守门人。
Gilgamesh（ギルガメッシュ声优：关智一／台湾：吴文民）
身高：182cm体重：63kg
印象颜色：金
擅长：带着金钱
喜欢的东西：自己、权力难对付的东西：自己、蛇
属性：混沌·善
本作幻之第八名从者，前回（第4次）圣杯战争中与Saber留到最后的英灵，最后Saber也没办法得知他的身分，因为找不到他象征性的宝具。曾在前次对决时向Saber表白但失败。也出现在动画剧情中。个性超级自大，完全的自我中心，但本人自称“不骄傲的哪算是王！”。
真名为英雄王“吉尔加美什”（（ギルガメッシュ，Gilgamesh）），为苏美尔传说中乌鲁克的国王。宝具是王之财宝（GateofBabylon），源自于基加美修收集全世界的宝具，将无数的珍贵兵器当成箭射出。宝具“天之锁（ChainofHeaven）”神性愈高就会锁得愈紧，还拥有唯一的对界宝具─“开天辟地·创世之星”（EnumaElish，名称源自于巴比伦古代史诗）。个人能力在众多Servent中仅仅偏上，远不如骑士王，甚至不敢与Saber近身战斗；但凭其宝具质量、数量，实力远超过其它Servent，Saber亦无法与之对敌。只有游戏版完成了固有结界的士郎可以一决高下。
由于将宝具作为弓矢使用的方法，因此在第四次圣杯战争职阶为Archer。
除了他大概没有其他英灵可以抵抗圣杯的黑色物质，他的高傲就连黑色物质也没有办法污染。